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    1. 文章詳情

      酶法ELISA試劑盒操作步驟

      日期:2022-04-18 11:17
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      摘要: 一、試驗原理 酶法試劑盒(ELISA)試驗原理是使抗原或抗體結合到某種固相載體外表,并保持其免疫活性;使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保存其免疫活性,又保存酶的活性。 在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的過程與固相載體外表的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構成的抗原抗體復合物與其他物質分開,終究結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的份額。參加酶反響的底物后,底物被酶催化變為有色產品,產品的量與標...
      一、試驗原理
      酶法ELISA試劑盒試驗原理是使抗原或抗體結合到某種固相載體外表,并保持其免疫活性;使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保存其免疫活性,又保存酶的活性。

      在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的過程與固相載體外表的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構成的抗原抗體復合物與其他物質分開,終究結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的份額。參加酶反響的底物后,底物被酶催化變為有色產品,產品的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據色彩反響的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可ji大地地放大反響作用,從而使測定辦法到達很高的敏感度。

      二、酶法ELISA試劑盒操作過程

      1.ELISA在操作前試劑和組分都先康復到室溫,規范品、質控品和樣品,主張做復孔。按前面試劑預備中描述的辦法,配制好試劑盒各種組分的工作液。從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
      2.設置規范品孔、樣本孔和空白孔,規范品孔各加不同濃度的規范品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。除空白孔外,規范品孔和樣本孔,參加辣根過氧化物酶符號的檢測抗體100μL。用封板膜蓋住反響板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
      3.溫育好后揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗刷液,靜置20s,甩去洗刷液,吸水紙上拍干。如此重復4次(共洗板5次)。若使用主動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,增加浸泡20s的程序,可以進步檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充沛拍干反響板。洗刷在ELISA過程中雖不是一個反響過程,但卻決議著試驗的勝敗。ELSIA就是靠洗刷來到達別離游離的和結合的酶符號物的意圖。經過洗刷以鏟除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反響過程中非特異性地吸附于固相載體的攪擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗刷時應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來??梢哉f在ELISA 操作中,洗刷是主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗刷,不得馬虎。   
      4.洗板好后將底物A和B按1:1體積充沛混合,所有孔中參加底物混合液100μL。用封板膜蓋住反響板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。所有孔參加停止液50μL,在酶標儀上讀取各孔吸光度(OD值)。
      5.檢測完成后,以規范品濃度做為縱坐標,對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用核算機軟件,采用四參數Logistic曲線擬合(4-pl),創立規范曲線方程,經過樣本的吸光度(OD值),利用方程核算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋,經過上述辦法測的的濃度值,要乘以稀釋倍數,才是樣品的終究濃度。
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